據(jù)麥姆斯咨詢報道,近日,深圳灣實驗室細胞分析研究所質(zhì)譜團隊與中國科學院深圳先進技術研究院醫(yī)工所生物醫(yī)學光學與分子影像研究中心微流控團隊合作,將微流控與自上而下質(zhì)譜(top-down mass spectrometry)在線聯(lián)用,在解析蛋白質(zhì)高級結(jié)構和動力學表征方面取得進展。研究成果發(fā)表于Analytical Chemistry期刊。
蛋白質(zhì)是生命的物質(zhì)基礎,也是生命活動的承擔者,因此蛋白質(zhì)研究是生物學領域的重要內(nèi)容。蛋白質(zhì)由20種不同的氨基酸通過肽鍵連接成線性高分子鏈,具有特殊的三維空間結(jié)構。其生物功能與結(jié)構動力學特征緊密相關。不同結(jié)構運動模式?jīng)Q定了蛋白質(zhì)在生化過程中的不同生物功能。對于研究蛋白質(zhì)的生物學功能和潛在機制來說,表征蛋白質(zhì)高級結(jié)構和動力學至關重要。
然而,目前仍然缺乏行之有效的蛋白質(zhì)3D結(jié)構表征手段?;诖?,研究團隊設計了一種微流控芯片-質(zhì)譜聯(lián)用(TDK-MS chip)方案,用于對蛋白質(zhì)高級結(jié)構和動態(tài)學進行自上而下質(zhì)譜在線分析。
自下而上(bottom-up)和自上而下(top-down)是兩種基于生物質(zhì)質(zhì)譜分析的蛋白質(zhì)組學方法。其中蛋白質(zhì)組學研究中廣泛使用的是自下而上法,即鳥槍法。該方法是將大蛋白片段水解/酶解為肽段,然后進行分析。而自上而下法主要用于表征混合物中的多個完整蛋白。該方法在蛋白質(zhì)鑒定、分析、序列分析和翻譯后修飾表征方面有很大潛力,其與非變性質(zhì)譜結(jié)合可以分析蛋白質(zhì)復合物的結(jié)構和亞基類型以及修飾;與氫/氘交換質(zhì)譜結(jié)合可為構象或結(jié)合界面分析提供更高的空間分辨率,并實現(xiàn)構象特異性表征。
微流控芯片技術將樣品制備、反應、分離和檢測等實驗室的基本功能縮微到一個幾平方厘米的芯片上,可為相應流程所需的前端反應提供多反應物的操控靈活性、多功能模塊集成化和自動化等功能。
微流控芯片-質(zhì)譜聯(lián)用方案可用于時間分辨的非變性自上而下質(zhì)譜和氫/氘交換自上而下質(zhì)譜分析,能夠?qū)崿F(xiàn)完整蛋白及其復合物的高效離子化,靈活操控多種反應物液流,提供較寬的流速調(diào)控范圍,并可在nL/min量級精確控制蛋白反應時間。研究團隊在實驗中驗證了該方案對單克隆抗體、抗體-抗原復合物、共存蛋白質(zhì)構象異構體等多個體系的高級結(jié)構分析結(jié)果。
該方案的成功開發(fā)為蛋白質(zhì)結(jié)構和動力學研究提供了一種更有效的方法,有利于蛋白質(zhì)組學研究的進一步深入,為生物學前沿研究提供了有力幫助。
論文鏈接:
https://doi.org/10.1021/acs.analchem.2c00077
審核編輯 :李倩
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原文標題:微流控與質(zhì)譜聯(lián)用,用于蛋白質(zhì)結(jié)構和動力學表征
文章出處:【微信號:Micro-Fluidics,微信公眾號:微流控】歡迎添加關注!文章轉(zhuǎn)載請注明出處。
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