采用LAMP溫擴增技術(shù)檢測細菌的靈敏度和重復(fù)性

本文采用 LAMP 等溫擴增技術(shù)檢測細菌，對其檢測靈敏度和重復(fù)性做了相關(guān)驗證。

如圖 1 所示，尺寸為 75 x 28 mm 的微流控芯片有多個反應(yīng)井組成可用于多重檢測。其中，每個芯片含有 10 或 18 個井，每個井體積約 4 ul。

每個反應(yīng)井通過自身的分配通道連接到一個公共的進樣通道上。同時每個反應(yīng)井通過自身分配通道連接有一個疏水通氣孔。

圖 1

為了防止在LAMP擴增過程中產(chǎn)生交叉污染，如圖 2 所示，一個帶扣的專用塑料外殼被用來密封芯片樣品裝載口和排氣口。

芯片和外殼分別采用聚碳酸酯和尼龍注塑而成。

圖 2

在樣品加載過程中，采用移液器將反應(yīng)混合物通過進樣通道推到各個分配通道進而進入多個反應(yīng)井中。擴增所需的引物實現(xiàn)被埋在反應(yīng)井中。

同時，芯片內(nèi)的空氣通過排氣孔排出，這使得所有反應(yīng)井中的試劑分配均勻。

圖 3

芯片和匹配的卡殼結(jié)構(gòu)如圖 3 所示。

一個具備18個反應(yīng)井的芯片的操作流程如圖 4 所示。

圖 4

芯片配套的儀器重約 7kg,其尺寸為 353 x 340 x 178 mm，主要由溫控模塊和成像模塊組成。

樣品加載完后，將芯片插入儀器上對應(yīng)的四個插件槽之一。儀器中最多可同時進行四個樣品檢測。

圖 5

溫控模塊由用于加熱的半導(dǎo)體制冷器和用于溫度測量的熱電偶組成。

如圖 5 所示，為了實時對多個芯片進行成像，采用線性平移平臺來控制成像模塊的水平移動。

審核編輯：劉清