721型分光光度計(jì)應(yīng)用及注意事項(xiàng)

　　721可見分光光度計(jì)

　　在比色分析中，有色物質(zhì)溶液顏色的深度決定于入射光的強(qiáng)度、有色物質(zhì)溶液的濃度及液層的厚度。當(dāng)一束單色光照射溶液時(shí)，入射光強(qiáng)度愈強(qiáng)，溶液濃度愈大，液層厚度愈厚，溶液對(duì)光的吸收愈多，它們之間的關(guān)系，符合物質(zhì)對(duì)光吸收的定量定律，即Lambert-Bear 定律。這就是分光光度法用于物質(zhì)定量分析的理論依據(jù)。

　　721可見分光光度計(jì)采用經(jīng)典的光路系統(tǒng)和精良的制造工藝，使儀器的測(cè)試精度及穩(wěn)定性較傳統(tǒng)產(chǎn)品有很大的提高；廣泛適用于冶金、化工、機(jī)械、醫(yī)學(xué)、生物、農(nóng)業(yè)、環(huán)保、教學(xué)等行業(yè)和領(lǐng)域。該儀器也是食品廠辦QS認(rèn)證中的必備檢驗(yàn)設(shè)備。

　　原理

　　光是一種電磁波，具有一定的波長(zhǎng)和頻率?？梢姽獾牟ㄩL(zhǎng)范圍在400~760nm，紫外光為200~400nm，紅外光為760~500000nm?？梢姽庖虿ㄩL(zhǎng)不同呈現(xiàn)不同顏色，這些波長(zhǎng)在一定范圍內(nèi)呈現(xiàn)不同顏色的光稱單色光。太陽或鎢絲等發(fā)出的白光是復(fù)合光，是各種單色光的混合光。利用棱鏡可將白光分成按波長(zhǎng)順序排列的各種單色光，即紅、橙、黃、綠、青、藍(lán)、紫等，這就是光譜。

　　有色物質(zhì)溶液可選擇性地吸收一部分可見光的能量而呈現(xiàn)不同顏色，而某些無色物質(zhì)能特征性地選擇紫外光或紅外光的能量。物質(zhì)吸收由光源發(fā)出的某些波長(zhǎng)的光可形成吸收光譜，由于物質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)不同，對(duì)光的吸收能力不同，因此每種物質(zhì)都有特定的吸收光譜，而且在一定條件下其吸收程度與該物質(zhì)的濃度成正比，分光光度法就是利用物質(zhì)的這種吸收特征對(duì)不同物質(zhì)進(jìn)行定性或定量分析的方法。

　　721型分光度計(jì)應(yīng)用及注意事項(xiàng)

　　1 721 分光光度計(jì)的使用方法

　　1.1 在接通電源之前，電表的指針必須位于“0”刻度線，否則應(yīng)旋轉(zhuǎn)電表上的校正螺絲調(diào)節(jié)到位。

　　1.2 打開比色皿室的箱蓋和電源開關(guān)， 使光電管在無光照射的情況下預(yù)熱 15min 以上。

　　1.3 旋轉(zhuǎn)波長(zhǎng)調(diào)節(jié)器，選擇測(cè)定所需的單色光波長(zhǎng)。 選擇適當(dāng)?shù)撵`敏度，一般先將靈敏度旋鈕調(diào)至中間位置，用零點(diǎn)調(diào)節(jié)器調(diào)節(jié)電表指針至 T 值為 10%處。 若不能調(diào)到，應(yīng)適當(dāng)增加靈敏度。

　　1.4 放入空白溶液和待測(cè)溶液，使空白溶液置于光路中，蓋上比色皿室箱蓋，使光電管受光，調(diào)節(jié)光量調(diào)節(jié)旋鈕使電表在 T 值為 100%處。

　　1.5 打開比色皿室箱蓋（關(guān)閉光門），調(diào)節(jié)零點(diǎn)調(diào)節(jié)器使指針在 T 值為 0%處，然后蓋上箱蓋（打開光門），調(diào)節(jié)光量調(diào)節(jié)旋鈕使指針在 T 值為 100%處。如此反復(fù)調(diào)節(jié)，直到關(guān)閉光門時(shí)和打開光門時(shí)指針分別在 T 值為 0%和 100%處為止。

　　1.6 將待測(cè)溶液置于光路中，蓋上箱蓋，由此時(shí)指針的位置讀得待測(cè)溶液的 T 值或 A 值。

　　1.7 測(cè)量完畢后，關(guān)閉開關(guān)，取下電源插頭，取出比色皿洗凈擦干、放好。 蓋好比色皿暗箱，蓋好儀器。

　　2 721 分光光度計(jì)的使用注意事項(xiàng)

　　2.1 使用比色皿，只能拿毛玻璃的兩面，并且必須用擦鏡紙擦干透光面，以保護(hù)透光面不受損壞或產(chǎn)生斑痕。 在用比色皿裝液前必須用所裝溶液沖洗 3 次，以免改變?nèi)芤旱臐舛取?比色皿在放入比色架時(shí)，應(yīng)盡量使它們的前后位置一致，以減少測(cè)量誤差。

　　2.2 需要大幅度改變波長(zhǎng)時(shí)，在調(diào)整 T 值為 0%和 100%之后，應(yīng)稍等片刻（因鎢絲燈在急劇改變亮度后，需要一段熱平衡時(shí)間），待指針穩(wěn)定后再調(diào)整 T 值為 0%和 100%。

　　2.3 當(dāng)被測(cè)溶液濃度太大時(shí)，可在空白溶液處加一塊中性濾光片（所謂中性是指它們?cè)诤軐挼牟ㄩL(zhǎng)范圍內(nèi)的透光率基本相同），其 A 值有 0.5、1 和 1.5 三種。 所謂 A 值為 1 是標(biāo)稱值，實(shí)際在 1 左右，須經(jīng)使用的儀器在實(shí)際使用的波長(zhǎng)下測(cè)定其實(shí)際數(shù)值， 例如∶測(cè)得吸光片的實(shí)際數(shù)值為 0.95，在空白溶液處加此吸光片后，被測(cè)溶液在電表上的讀數(shù)為 0.74，則該溶液的實(shí)際值為∶0.74+0.95=1.69。

　　2.4 根據(jù)溶液的含量大小選擇不同光程長(zhǎng)度的比色皿，使電表讀數(shù) A 值在 0.1～1 之間，這樣可以得到較高的準(zhǔn)確度。

　　2.5 為確保儀器工作穩(wěn)定，在電源電壓波動(dòng)較大的地方，應(yīng)加一個(gè)穩(wěn)定電源。 同時(shí)儀器應(yīng)保持接地良好。

　　2.6 在儀器的底部有兩只干燥劑筒， 應(yīng)經(jīng)常檢查。 發(fā)現(xiàn)干燥劑失效時(shí)，應(yīng)立即更換或烘干后再用。 比色皿暗箱內(nèi)的硅膠也應(yīng)定期取出烘干后再放回原處。

　　2.7 為了避免儀器積灰和沾污，在停止工作時(shí)，應(yīng)用罩子罩住儀器。儀器在工作幾個(gè)月或經(jīng)搬動(dòng)后，要檢查波長(zhǎng)的準(zhǔn)確性，以確保儀器的正常使用和測(cè)定結(jié)果的可靠性。

　　3 721 分光光度計(jì)的校正方法波長(zhǎng)讀數(shù)校正的方法很多，例如

　　（1）可用波長(zhǎng)精度很高的干涉濾光片。

　　（2）已知吸收峰（λ 最大）波長(zhǎng)的有色物質(zhì)的溶液等做標(biāo)準(zhǔn)來校正。 前一種方法需要特殊的設(shè)備，其精確度較高；后一種方法簡(jiǎn)易可行，精確度較差，但對(duì) 721 型分光光度計(jì)來說，這種方法已能夠滿足要求。

　　配制一已知 λ 最大的物質(zhì)的適當(dāng)濃度的溶液，用待校正的儀器在該物質(zhì)的 λ 最大±20nm 范圍內(nèi)，用不同的波長(zhǎng)測(cè)定其 A 值。 可從小于該有色溶液的 λ 最大約 20nm 處開始，每隔 2nm 測(cè)定一次，至波長(zhǎng)大于該溶液 λ 最大的約 20nm 為止。 例如用高錳酸鉀溶液來校正， 其 λ 最大為 525nm。 故在 505 至 545nm 之間，每隔 2nm 測(cè)定一次吸光度。將測(cè)定結(jié)果作吸收曲線，所得曲線有一吸收峰（若未所得曲線未呈現(xiàn)吸收峰，則表示此儀器波長(zhǎng)讀數(shù)偏差大于 20nm，應(yīng)擴(kuò)大測(cè)定的波長(zhǎng)范圍），設(shè)此吸收峰的波長(zhǎng)為 λ′最大，將它與已知的 λ 最大比較，其差即為波長(zhǎng)校正值，以 λ 校表示∶λ 校＝λ 最大-λ′最大。

　　若波長(zhǎng)校正值 λ 校很大，則需要重新調(diào)整勵(lì)光燈泡，或檢修單色器的光學(xué)系統(tǒng)。 若波長(zhǎng)校正值小于 10nm，則可在使用該儀器時(shí)，用校正值來校正波長(zhǎng)。 當(dāng) λ 校為正值時(shí)，表示該儀器的波長(zhǎng)讀數(shù)較真實(shí)的波長(zhǎng)偏高。 因此在使用該儀器時(shí)，若測(cè)定某一溶液時(shí)所需選定的波長(zhǎng)為 λ 測(cè)，那么應(yīng)調(diào)至的波長(zhǎng)讀數(shù)（λ 讀）則為∶

　　λ 讀=λ 測(cè)-λ 校

　　例如用高錳酸鉀溶液（其 λ 最大為 525nm）校正一儀器，測(cè)得其吸收峰 λ′最大為 530nm，則∶λ 校＝λ 最大-λ′最大＝525nm-530nm＝-5nm

　　用該儀器測(cè)定鄰菲羅啉鐵時(shí)，應(yīng)選用的波長(zhǎng)為 510nm，其波長(zhǎng)讀數(shù)標(biāo)尺應(yīng)旋至 λ 讀：λ 讀＝λ 測(cè)-λ 校＝510nm-（-5nm）＝515nm

　　即波長(zhǎng)讀數(shù)應(yīng)調(diào)至 515nm，而此時(shí)真實(shí)的波長(zhǎng)為 510nm，即鄰菲羅啉鐵的 λ 最大。

　　4 小結(jié)

　　721 分光光度計(jì)使用方便，能耗低，穩(wěn)定性好，便于調(diào)校，準(zhǔn)確度比較高，使用范圍比較寬，所以仍將在分析化驗(yàn)領(lǐng)域內(nèi)發(fā)揮重要的作用。